? ? ? ? 什么是固定相？簡而言之就是在色譜分離中固定不動、對樣品產(chǎn)生保留的一相。固定相的選擇對樣品的分離起著重要作用，有時甚至是決定性的作用。不同類型的色譜采用不同的固定相，如氣-固色譜的固定相為各種具有吸附活性的固體吸附劑；氣-液色譜的固定相是載體表面涂漬的固定液，液相色譜中的固定相為各種鍵合型的硅膠小球，離子交換色譜中的固定相為各種離子交換劑，排阻色譜中的固定相為各種不同類型的凝膠等等。以下，恒譜生將簡單帶大家了解一下固定相的不同類型以及它們有什么特點(diǎn)。
? ? ? ? 正相色譜
? ? ? ? 正相色譜柱填料極性強(qiáng)，洗脫順序由弱到強(qiáng)。
? ? ? ? 正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán)，如（NH2，APS）和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。
? ? ? ? 由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。恒譜生有多款正相色譜柱，比如Diol、SiL色譜柱等，可以用于分析堿性有機(jī)化合物，如維生素、類固醇以及其它許多藥物分子等。
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? ? ? ? 反向色譜
? ? ? ? 反相色譜柱填料極性弱，洗脫順序由強(qiáng)到弱。
? ? ? ? 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
? ? ? ? 色譜柱是HPLC分離過程中的核心，而反相色譜柱其分析能力強(qiáng)，常作為分析柱的首選。恒譜生 C18 色譜柱在選擇性，梯度和等度條件上都有出色峰形；更高的分離度、靈敏度和重現(xiàn)性；更寬的 pH 耐受性，適合分析各種類型的化合物。除此之外，恒譜生還有多種不同類型的液相色譜柱可供選擇，比如C4、C8，ODS等色譜柱。
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? ? ? ? 離子交換色譜
? ? ? ? 離子交換色譜法的固定相為離子交換劑，常用的有離子交換樹脂和化學(xué)鍵合離子交換劑。經(jīng)典離子交換色譜法的固定相為離子交換樹脂，其缺點(diǎn)是易于膨脹，傳質(zhì)較慢，柱效低。不耐高壓。
? ? ? ? 親和色譜
? ? ? ? 親和色譜也稱為親和層析，是一種利用固定相的結(jié)合特性來分離分子的色譜方法。將一對能可逆結(jié)合和解離生物分子的一方作為配基（也稱為配體），與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯(lián)、制成專一的親和吸附劑，再用此親和吸附劑填充色譜柱，當(dāng)含有被分離物質(zhì)的混合物隨著流動相流經(jīng)色譜柱時，親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其結(jié)合的物質(zhì)，而其他的蛋白質(zhì)及雜質(zhì)不被吸附，從色譜柱中流出，使用適當(dāng)?shù)木彌_液使被分離物質(zhì)與配基解吸附，即可獲得純化的目的產(chǎn)物。它可以用來從細(xì)胞提取物中分離純化核酸、蛋白，還可以從血漿中分離抗體。
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? ? ? ? ?總之，不論是何種類型的固定相對于手性異構(gòu)體的拆分以及蛋白質(zhì)和多肽大分子的分離仍在不斷的探索完善之中，生物科學(xué)在進(jìn)步，相信未來有關(guān)色譜固定相的研究會越來越完善與開拓新的方向。恒譜生作為色譜耗材的高科技制造商，也將助推色譜行業(yè)發(fā)展，為廣大的色譜工作者提供高品質(zhì)的色譜耗材產(chǎn)品。
發(fā)布于: 2021-05-07